三聚氰胺檢測卡基于競爭抑制免疫層析技術(shù),通過抗原抗體特異性結(jié)合實(shí)現(xiàn)快速篩查。其核心原理可分為以下步驟:
1.膠體金標(biāo)記抗體:信號(hào)載體與識(shí)別元件
檢測卡中預(yù)先將抗三聚氰胺單克隆抗體與膠體金顆粒(直徑20-40nm)結(jié)合,形成金標(biāo)抗體復(fù)合物。膠體金顆粒通過靜電作用穩(wěn)定分散,其表面標(biāo)記的抗體可特異性識(shí)別三聚氰胺分子。例如,深圳后王電子科技有限公司的檢測卡采用高親和力單克隆抗體,確保對(duì)三聚氰胺的檢測靈敏度達(dá)0.5mg/kg(液態(tài)奶)。
2.硝酸纖維素膜固定抗原:檢測線與質(zhì)控線
在硝酸纖維素膜上,通過噴涂技術(shù)固定兩條關(guān)鍵線:
檢測線(T線):包被三聚氰胺-載體蛋白偶聯(lián)物(如三聚氰胺與牛血清白蛋白結(jié)合),作為競爭結(jié)合位點(diǎn)。
質(zhì)控線(C線):包被抗鼠IgG抗體,用于驗(yàn)證檢測流程有效性。
3.競爭反應(yīng):樣本中的三聚氰胺與固定抗原“爭奪”抗體
當(dāng)樣本(如液態(tài)奶、奶粉稀釋液)滴入加樣孔后,通過毛細(xì)作用沿膜層析:
陰性樣本:不含三聚氰胺時(shí),金標(biāo)抗體未被結(jié)合,繼續(xù)遷移至T線,與固定偶聯(lián)物結(jié)合形成紅色條帶;同時(shí),部分金標(biāo)抗體與C線抗鼠IgG結(jié)合,顯示第二條紅色條帶。此時(shí)T線和C線均顯色,判定為陰性。
陽性樣本:含三聚氰胺時(shí),樣本中的三聚氰胺與金標(biāo)抗體結(jié)合,封閉其抗原結(jié)合位點(diǎn),阻止其與T線偶聯(lián)物結(jié)合,導(dǎo)致T線不顯色;而C線仍顯色,驗(yàn)證檢測有效。此時(shí)僅C線顯色,判定為陽性。
4.結(jié)果判定與靈敏度控制
靈敏度:通過調(diào)整金標(biāo)抗體濃度、T線偶聯(lián)物密度及層析速度,實(shí)現(xiàn)檢測限優(yōu)化。例如,智云達(dá)檢測卡對(duì)液態(tài)奶的檢測限為0.5mg/kg,嬰兒奶粉為1mg/kg。
無效判定:若C線未顯色,無論T線如何,均視為檢測卡失效,需重新檢測。